Nuevo estudio - Inmunidad contra el SARS-CoV-2 después de la infección o no.? Hide Article

Un estudio de Long et al., Publicado recientemente en la reconocida revista científica "Nature" (https://doi.org/10.1038/s41591-020-0965-6), enfatiza fuertemente por qué es necesario, durante y después de la pandemia por el Coronavirus usar pruebas de anticuerpos fácilmente disponibles y realizadas de manera eficiente, tales como ensayos de inmunoabsorción enzimática (ELISA).

En el estudio mencionado anteriormente, los investigadores chinos alrededor de Long y Huang compararon muestras de la megaciudad Chongqing. Examinaron muestras de 74 pacientes con y sin síntomas. Después de una infección, el cuerpo genera una respuesta inmune para eliminar un patógeno. El sistema inmune primero produce anticuerpos IgM e IgA. Una vez que el patógeno es reconocido y combatido, se producen anticuerpos IgG. Los anticuerpos IgG ofrecen cierta protección contra futuras infecciones por SARS-CoV-2 y se detectan en la sangre como los llamados títulos de anticuerpos. Estos anticuerpos IgG forman la memoria del sistema inmune durante muchos años. Las vacunas funcionan de manera similar al enseñar al sistema inmunitario a producir anticuerpos para proteger contra patógenos específicos.

Las pruebas cuantitativas de anticuerpos que se dirigen a los anticuerpos neutralizantes se encuentran entre las herramientas más importantes para que los médicos determinen un título que refleje el valor de una respuesta inmune protectora a la infección. Por lo tanto, el título requerido para una vacuna efectiva.

Long y col. han investigado este hecho determinando por ELISA los niveles de IgM e IgG en muestras de pacientes. Aunque la muestra de pacientes es pequeña, el estudio no muestra una disminución insignificante de anticuerpos en el grupo de pacientes con síntomas leves a moderados. Solo el 62.2 por ciento de los pacientes del grupo sin síntomas tenían anticuerpos en la sangre unas pocas semanas después de la infección. En el grupo de pacientes sintomáticos, el 78.4 por ciento todavía tenía anticuerpos en la sangre en el mismo periodo.

Después de aproximadamente ocho semanas, los exámenes de seguimiento mostraron que la concentración de anticuerpos en la sangre de los pacientes sin síntomas disminuyó en un 81,1 por ciento. En el grupo de pacientes sin síntomas, la disminución fue sólo del 62,2 por ciento. El grupo de Long y Huang también identificó a los pacientes positivos para el SARS-CoV-2 mediante ELISA, que previamente habían sido categorizados como negativos mediante RT-PCR. Un examen de las muestras para detectar las citoquinas implicadas en la reacción inmunológica, incluidas las proteínas G y M-CSF, IL2, IL6, CCL2, IFN-γ, muestra que los pacientes sintomáticos tenían un valor más alto de estas proteínas, lo que indica una respuesta inmunológica más fuerte.

Aunque el estudio mencionado anteriormente solo involucró una muestra relativamente pequeña, los resultados ponen en duda suposiciones previas de que los síntomas fuertes representan un alto riesgo de infección y que cualquier persona que haya sobrevivido a una infección es inmune a futuras infecciones.

En el Imperial College de Londres, el profesor Altmann confirma el presente estudio, afirmando que la mayoría de las personas infectadas muestran solo síntomas leves o ningún síntoma. La pregunta crucial es si han mantenido una inmunidad protectora. Para él, es un punto esencial pero también preocupante, que muchos pacientes en el estudio mostraron una caída significativa en la concentración de anticuerpos solo 6-7 semanas después del inicio de la enfermedad. Long y col. escribe que la disminución de IgG y anticuerpos neutralizantes en la convalecencia temprana influirá en la estrategia inmune y las investigaciones serológicas.

Aquí es exactamente donde AESKU ve el punto de partida de las pruebas cuantitativas AEKULISA SARS-CoV-2 y ofrece seis kits diferentes para la detección y monitoreo del estado inmune.

 

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Sobre la pista del virus - Pruebas de anticuerpos de AESKULISA SARS-CoV-2

AESKU quiere proporcionar seguridad con ensayos cuantitativos ELISA de SARS-COV-2, ahora y en el futuro.

Corona VirusEn la situación actual, apenas es necesario discutir sobre la necesidad urgente de una vacuna eficaz y robusta para tratar COVID-19, porque nuestra sociedad y la humanidad misma están en estado de emergencia. Sin embargo, no solo se necesita con urgencia una vacuna, sino que el éxito de la vacunación también debe verificarse mediante pruebas cuantitativas. Las pruebas cuantitativas reaccionan a los anticuerpos neutralizantes, es decir, los anticuerpos que responden a un patógeno y lo descomponen, y hacen posible determinar el éxito de una respuesta inmune y una vacuna en la práctica diaria.

Para la determinación de una reacción inmune, el análisis de inmunoglobulinas, los llamados anticuerpos, se ha establecido durante años. Dado que las estructuras de proteínas en la superficie de un patógeno (bacteria, virus) son específicas, es decir, únicas para estructuras individuales, el sistema inmunitario forma el anticuerpo apropiado; Es posible examinar diferentes anticuerpos para confirmación e infección. En el caso de los virus SARS-CoV-2, la proteína nucleocápside (N) y la proteína espiga (S1) son adecuadas.

 

AESKU OFRECE SEIS INMUNOENSAYOS DIFERENTES:

AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgM/ IgA / IgG*

Las pruebas AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgA*, IgG* e IgM* son inmunoensayos cualitativos y cuantitativos para la detección de anticuerpos IgM, IgA e IgG humanos en suero o plasma dirigidos contra el SARS-CoV-2 en la proteína nucleocápside altamente conservada (NP). La proteína nucleocápside es muy reactiva y estimula una fuerte respuesta inmune. Esta potente respuesta inmune proporciona una detección muy sensible de anticuerpos, lo que permite una clara diferenciación entre muestras positivas y negativas.

Por lo tanto, son ideales para la detección de IgM, IgG e IgA para cribado y diagnóstico. Debido a la alta sensibilidad y la fuerte conservación de la proteína de la nucleocápside en la familia de los coronavirus, aumenta el riesgo de reacción cruzada con anticuerpos contra el SARS-CoV-1. Dado que los anticuerpos contra la proteína nucleocápside no tienen efecto neutralizante, no son adecuados para determinar el estado inmune, el llamado título de anticuerpos.

AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgA*  Prueba de anticuerpos ( Proteína nucleocápside )
se recomienda para la detección de infecciones agudas.
AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgG* Prueba de anticuerpos (Proteína nucleocápside)
permite la confirmación del contacto del patógeno y la determinación del estado inmune.
AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgM* Prueba de anticuerpos (Proteína nucleocápside)
permite determinar la primera reacción específica del sistema inmune.

AESKU utiliza proteínas de nucleocápsides inmunogénicas de SARS-CoV-2 expresadas en células de insecto para la detección sensible de anticuerpos IgM, IgA e IgG.

AESKULISA®
Sensibilidad
Especificidad
SARS-CoV-2 NP IgA*
98.3 %
> 99%
SARS-CoV-2 NP IgG*
95.2 %
> 99 %

Tabla 1: Sensibilidad y especificidad de AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgA e IgG se evaluaron mediante el análisis de 76 muestras de suero de donantes de sangre sanos (2018) y 20 individuos con COVID-19 clínicamente confirmado utilizando los hallazgos clínicos como referencia.

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgM/ IgA / IgG

Las pruebas AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA, IgG e IgM son inmunoensayos cualitativos y cuantitativos para la detección de anticuerpos humanos IgM, IgA e IgG en suero o plasma dirigidos contra SARS-CoV-2 por la proteína espiga altamente específica (S1).La proteína espiga tiene la ventaja sobre la proteína nucleocápside que es altamente específica para el virus SARS-CoV-2.

Resultando en un riesgo mucho menor de reacciones cruzadas con anticuerpos contra otros miembros de la familia del coronavirus. Los anticuerpos IgG reaccionan contra el dominio de unión al receptor (RBD) en las proteínas de la espiga. Se consideran neutralizantes y, por lo tanto, adecuados para controlar el título de anticuerpos de los pacientes.

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA Prueba de anticuerpos ( Proteína Spike )
se recomienda para la detección de infecciones agudas.
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG Prueba de anticuerpos ( Proteína Spike )
permite la confirmación del contacto del patógeno y la determinación del estado inmune. Se puede usar para detectar y controlar el título de anticuerpos de un paciente..
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgM Prueba de anticuerpos ( Proteína Spike )
permite determinar la primera reacción específica del sistema inmune.

* submitted for Emergency Use Authorization (EUA) in USA

 

Asset 1 2Componentes del kit

  • MPT recubierta, sellada de aluminio con pocillos rompibles
  • 4 calibradores (A - D), calibrador B = calibrador de corte
  • Control positivo y negativo.
  • Tampón de dilución de muestra (Concentrado 5x .; para detección de IgM, incluido absorbente de Rf)
  • Tampón de lavado (Concentrado 50x .)
  • Conjugado (anti-humana IgG / IgA / IgM conjugado a POD)
  • Sustrato (TMB) y „Solución de parada “
  • Certificado de control de calidad y manual de instrucciones

 

 

Los inmunoensayos AESKULISA SARS-CoV-2 ofrecen al usuario final muchas ventajas únicas. Estas son las principales características que los distinguen de los kits de los competidores:

 

  • Uso de la proteína nucleocápside inmunogénica para la detección de anticuerpos IgA e IgG dirigidos contra SARS-CoV-2
  • Procesamiento estandarizado de AESKULISA® IgA, IgG e IgM con tiempos de incubación cortos (30 min, 30 min, 30 min) y temperaturas de incubación constantes
  • Optimizado para la incubación a temperatura ambiente.
  • Combinación de diferentes AESKULISA® en un mismo procesamiento
  • Reactivos listos para usar, diferenciados por color, con código de barras e intercambiables para un manejo de calidad garantizado en la rutina de los laboratorios.
  • Rentabilidad mediante el uso de tiras de micro-titulación rompibles y un número mínimo de calibradores y controles.
  • Controles positivo y negativo de acuerdo con las directrices modernas de gestión de calidad.
  • Cuantificación exacta de la actividad de anticuerpos específicos IgA, IgG e IgM del patógeno mediante el uso de la función logística precisa de 4 parámetros (4 PL) y la calibración de 4 puntos
  • Uso de Cal B como calibrador de corte para la evaluación cualitativa de datos.
  • Evaluación rápida de señales de medición utilizando soluciones de software estándar.
  • Excelente eficiencia diagnóstica con alta sensibilidad y especificidad garantizada por antígenos cuidadosamente seleccionados.
  • Alta precisión y linealidad dentro de amplios rangos de medición garantizados por un principio superior para la cuantificación de anticuerpos.
  • Certificado CE
  • Compatibilidad con los sistemas convencionales de lavado y lectura para ELISA.
  • Automatización completa en Triturus®, SQII, DSX e instrumentos comparables.
  • Triturus®, SQII, DSX e instrumentos comparables pueden conectarse en red de manera óptima utilizando HERA, el administrador de automatización de laboratorio de AESKU

 

COVID 19
El síndrome respiratorio agudo severo (SARS) -CoV, así como el síndrome respiratorio del Medio Oriente (MERS) y el SARS CoV 2 (SARS-CoV-2), pertenecen a la familia de Coronaviridae. Todos estos tres virus son patógenos y causan problemas respiratorios en humanos. En diciembre de 2019, se observaron varios casos inesperados de neumonía en China.

El gobierno y los investigadores de salud en ese país siguieron estrategias para controlar el brote del virus y programaron un estudio etiológico. Finalmente, la Organización Mundial de la Salud (OMS) anunció que el SARS-CoV-2 sería el causante de la enfermedad por coronavirus en 2019 (COVID-19). Se estima que el período de incubación de COVID-19 es de 1 a 14 días. El pulmón es el principal órgano afectado por COVID-19.

AESKU Corona Virus open

Sin embargo, en casos graves, otras partes del cuerpo, como el sistema nervioso central (SNC), los riñones, el hígado, el corazón, el estómago y los intestinos también pueden verse afectados. Al igual que con muchas otras enfermedades respiratorias, la gravedad de la infección causada por el SARS-CoV-2 puede variar de un paciente a otro. La evidencia reciente sugiere que algunos casos de infección por SARS-CoV-2 se han asociado con neumonía y dificultad respiratoria, mientras que otros pacientes diagnosticados con SARS-CoV-2 han experimentado insuficiencia respiratoria, shock séptico o insuficiencia multiorgánica.

Se informa que la tasa de mortalidad por infección es aproximadamente del 2%. Es posible la infección de otras personas durante el período de incubación y una fase aguda sin síntomas de la enfermedad.

Descubrimiento

Descubrimiento
Los estudios epidemiológicos de los primeros casos de neumonía SARS CoV-2 han demostrado que, en Wuhan, China, muchos casos se ocasionaron con contacto en el mercado de pescado. La OMS también informó que se encontró SARS-CoV-2 en muestras recolectadas del mercado de pescado. Sin embargo, todavía no se ha entendido completamente qué especies animales específicas portan SARS-CoV-2. Se sabe que el SARS-CoV y el MERS-CoV se originan de los murciélagos como reservorio primario y natural y se transmiten desde la civeta y los camellos a los humanos.

Taxonomía y estructura

Taxonomía y estructura
Los CoV son virus ARN monocatenarios, de 120-160 nm de largo, positivos a los sentidos, de origen animal, pertenecientes a la familia Coronaviridae y la categoría Nidovirales. Los CoV se dividen genotípicamente y serológicamente en cuatro grupos: α, β, γ y δ. Se han identificado aproximadamente 30 especies de CoV en vertebrados, mientras que en humanos, dominan los CoV de los grupos α y β. Los CoV pertenecen al grupo de los CoV β, y el SARS-CoV-2 es el tercer CoV animal zoonótico conocido después de los virus SARS y MERS, los cuales pertenecen al grupo de los CoV β.

En humanos, existen al menos siete CoV (hCoV): SARS-CoV-1 (SARS), MERS-CoV (MERS), SARS-CoV-2 (COVID-19, o simplemente COVID), y las enfermedades endémicas por hCoV NL63 , HKU1, OC43 y 229E, cuyos virus correspondientes están designados por el sufijo -CoV, como en MERS. Para cada uno de estos hCoV y CoV en general, la adsorción y la fusión están influenciadas por las glicoproteínas de espiga.

Transmisión

Transmisión
La transmisión de persona a persona es principalmente aerógena a través de finos aerosoles producidos al exhalar y hablar (infección por gotitas). El contacto directo con la saliva, el esputo o las secreciones nasofaríngeas también se considera altamente infeccioso. Dado que el virus tiene un tiempo de supervivencia comprobado en superficies de aproximadamente 16 horas, también es posible la infección a través de superficies contaminadas (infección de contacto).

Patogénesis y replicación

Patogénesis y replicación
Los espigas para SARS-CoV-1, SARS-CoV-2 y NL63-CoV se unen a la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2), MERS-CoV a dipeptidil peptidasa 4 (DPP4), HKU1-CoV y OC43-CoV 9-O- ácidos siálicos acetilados y 229E-CoV a aminopeptidasa N (APN). Según lo determinado por Clustal Omega, explica que los picos ( espiga) de SARS-CoV-1 y SARS-CoV-2 muestran una identidad de homología alta (76%) pero una homología relativamente débil con NL63-CoV (30% y 31% respectivamente). Los picos para NL63-CoV y 229E-CoV tienen una identidad de homología sorprendentemente alta (63%), con todas las demás identidades por pares de estos siete que van del 30% al 40%. El MERS, el SARS y varias enfermedades endémicas de hCoV parecen conferir inmunidad a corto y mediano plazo contra la reinfección. Las enfermedades endémicas por hCoV son estacionales y favorecen los meses de diciembre y enero, mientras que el MERS se propaga principalmente en junio. La estacionalidad de COVID y la inmunidad a la reinfección siguen siendo preguntas abiertas urgentes.

La envoltura del virus CoV tiene un diámetro en el rango de 105-140 nm, con cada glucoproteína espiga a la altura de ∼15-20 nm por encima de ella. En el extremo distal de la envoltura viral de la punta del trímero hay tres cabezas, cada una con su dominio de unión al receptor, que se cree que puede oscilar independientemente entre una conformación ascendente (o en posición vertical / abierta) y una descendente (horizontal / cerrado). Debido a restricciones estéricas, la unión de ACE2 solo puede ocurrir en la configuración ascendente. En hCoV en general, hay otros tres dominios de la espiga, llamados lóbulos, que están cerca de las cabezas cuando apuntan hacia arriba y adyacentes cuando apuntan hacia abajo. Estos dominios se producen en el siguiente patrón: la cabeza en la cadena A (B o C, en ese orden en sentido antihorario cuando se ve desde más allá del extremo distal de la envoltura del virus) se encuentra proximal al lóbulo en la cadena B (C y A). En los ejemplos de MERS-CoV y SARS-CoV-1, que están unidos a la superficie externa del virus como se describe, los epítopos también se encuentran en las cabezas.

El supuesto péptido de fusión del SARS-CoV-1 se encuentra centralmente entre las tres cabezas y es completamente bloqueado cuando las cabezas están plegadas. Después de la unión, la espiga sufre una dramática reconformación; Los detalles siguen siendo desconocidos. Sin embargo, finalmente entrega el paquete de 6 hélices que es característico de una proteína de fusión de clase I. Se sabe que muchas de las hCoV, incluido el SARS-CoV-2, ingresan a la célula a través de la endocitosis. En varios ejemplos investigados, la espiga está cubierta con un elaborado escudo de glucano. Tanto MERS-CoV como SARS-CoV-2, pero no el SARS-CoV-1, admiten un sitio de clivaje de furina que podría promover la fusión.

Sintomatología

Sintomatología
Además de infecciones completamente discretas clínicamente, hasta la fecha se han documentado cursos leves de enfermedad con síntomas similares a la gripe y tos seca. En algunos casos, también se han observado cursos graves de enfermedad con neumonía grave y síntomas cardiovasculares. Pueden ocurrir complicaciones, especialmente en pacientes de alto riesgo con enfermedades previas como hipertensión, diabetes mellitus y obesidad. En personas mayores de 60 años, pueden ocurrir condiciones potencialmente mortales, a veces con un desenlace fatal. Además del daño severo a los pulmones, hasta e incluyendo la insuficiencia pulmonar, se han descrito efectos tardíos graves en otros órganos como el hígado, los riñones, los vasos sanguíneos y el corazón, así como el daño permanente al sistema nervioso central.

Síntoma Clínico
Frecuencia
Fiebre
87,9 %
Tos seca
67,7 %
Molestias y fatiga
38,1 %
Aumento de la producción de saliva
33,4 %
Pérdida de olor
30 - 71 %
Dificultad para respirar
18,6 %
Dolor muscular o articular
14,8 %
Dolor de garganta
13,9 %
Dolor de cabeza
13,6 %
Resfriado
11,4 %
Náuseas vómitos
 
Resfriado común
4,8 %
Diarrea
3,7 %
Hemoptisis
0,9 %
Conjuntivitis
0,8 %

Terapia y profilaxis

Terapia y profilaxis
Hasta el momento no existe una terapia específica, pero actualmente se encuentra en desarrollo (estado al 20.05.2020). Alternativamente, se usan antivirales tales como inhibidores de proteasa e inhibidores de proteasa de ARN. Todas las terapias aplicadas actualmente tienen como objetivo aliviar los síntomas.

Respuesta inmune y perfiles de anticuerpos

Respuesta inmune y perfiles de anticuerpos
ILos anticuerpos IgM, IgG e IgA se producen durante las infecciones primarias con patógenos, en este caso, SARS-CoV-2. El organismo puede identificar las estructuras patológicas de un intruso (virus, bacterias) y formar una respuesta inmune a la medida, el llamado "principio de bloqueo llave cerradura". Estos anticuerpos se diferencian según el lugar y el momento de su aparición durante la respuesta inmune. IgM e IgA son las clases de anticuerpos que el cuerpo forma primero, es decir, anticuerpos de la fase aguda. IgM e IgA ya no son detectables en unas pocas semanas o meses después de la infección. Los anticuerpos de la clase G, es decir, IgG, forman la "memoria" del sistema inmune y generalmente son detectables a lo largo de la vida del paciente.

Solo se forman cuando la fase aguda de la infección disminuye y persiste por más tiempo en la sangre. En caso de reinfección, los anticuerpos IgA e IgG se forman muy rápidamente, mientras que los anticuerpos IgM a menudo no son detectables.

Best Paper Award AESKU

DST LogoAESKU.GROUP übernimmt DST Diagnostische Systeme & Technologien GmbH

Wendelsheim / Schwerin - AESKU.GROUP, Innovationsführer in der Autoimmundiagnostik übernimmt den Allergiespezialisten DST Diagnostische Systeme & Technologien GmbH und erweitert somit das eigene Produktportfolio um den Diagnostikbereich Allergie und Nahrungsmittelunverträglichkeiten.

mbl bion logoAESKU.GROUP übernimmt MBL BION

Die AESKU.GROUP hat die Übernahme des Immunfluoreszenztest-Spezialisten MBL BION abgeschlossen und damit das Immunfluoreszenz-Produktportfolio und deren Produktion erweitert.

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Neue Studie - SARS-CoV-2 Immunität nach Infektion oder nicht? Artikel verbergen

Eine Studie von Long et al, kürzlich publiziert in der renommierten Fachzeitschrift „Nature“ (https://doi.org/10.1038/s41591-020-0965-6), verdeutlicht mit viel Nachdruck warum es notwendig ist, während und auch nach der akuten Corona-Pandemie schnell verfügbare und leicht durchführbare Antikörper Tests, wie Enzyme-linked Immunosorbent Assays (ELISAs), zu nutzen.

In der genannten Studie vergleichen chinesische Forscher um Long und Huang Proben (74 Patienten mit und ohne Symptomen) aus der Millionenstadt Chongqing. Nach einer Infektion erzeugt der Körper eine Immunantwort, um einen Erreger zu beseitigen. Das Immunsystem stellt zunächst IgM- und IgA-Antikörper her. Ist der Erreger erkannt und wird bekämpft, werden IgG-Antikörper erzeugt, die einen gewissen Schutz vor zukünftigen SARS-CoV-2-Infektionen bieten und als sogenannter Antikörpertiter im Blut nachgewiesen werden können. Diese IgG-Antikörper bilden über viele Jahre das Gedächtnis des Immunsystems. Impfstoffe wirken in ähnlicher Weise, indem sie das Immunsystem lehren, Antikörper zum Schutz vor spezifischen Krankheitserregern zu produzieren.

Quantitative Antikörpertests die auf neutralisierende Antikörper abzielen, sind für Kliniker eines der wichtigsten Werkzeuge um einen Antikörpertiter bestimmen zu können, der den Wert einer schützenden Immunantwort für Infektionen wiederspiegelt, und somit den notwendigen Titer für einen wirksamen Impfstoff ermitteln lassen.

Long et al. haben dies untersucht, indem sie mittels ELISA den IgM und IgG-Titer in Patientenproben gemessen haben. Auch wenn es sich um eine kleine Patientenanzahl handelt, zeigt die Studie einen nicht unerheblichen Rückgang der Antikörper in der Patientengruppe mit leichten bis milden Symptomen. Nur noch 62,2 Prozent der Patienten aus der Gruppe ohne Symptome hatten wenige Wochen nach ihrer Infektion Antikörper im Blut. In der Gruppe der symptomatischen Patienten hatten immerhin noch 78,4 Prozent Antikörper im Blut.

Bei Folgeuntersuchungen nach ungefähr acht Wochen zeigte sich bei symptomlosen Patienten ein Rückgang der Antikörperkonzentration im Blut um weitere 81,1 Prozent. In der Gruppe der symptomatisch erkrankten Patienten dagegen nur um 62,2 Prozent. Die Gruppe um Long und Huang konnte mittels ELISA auch Patienten positiv für SARS-CoV-2 identifizieren, die zuvor mittels RT-PCR als negativ kategorisiert wurden. Eine Untersuchung der Proben auf an Immunreaktionen beteiligte Zytokine (u.a. G- und M-CSF, IL2, IL6, CCL2, IFN-γ) zeigt bei Patienten mit Symptomen eine höhere Konzentration dieser Proteine, dies weist auf eine stärkere Immunantwort hin.

Obwohl es sich in der genannten Studie nur um eine vergleichsweise kleine Stichprobe handelt, stellen die Ergebnisse bisherige Annahmen, dass starke Symptome eine hohe Ansteckungsgefahr darstellen und, dass jeder, der eine Infektion durchgestanden hat gegen zukünftige Ansteckungen immun sei, in Frage.

Danny Altmann, Professor am Imperial College London, bestätigt die vorliegende Studie und führt an, dass die meisten Infizierten nur leichte oder gar keine Symptome zeigen und die entscheidende Frage sei, ob sie damit eine dauerhaft schützende Immunität besäßen. Für ihn ist es ein wichtiger, aber auch beunruhigender Punkt, dass viele Patienten der Studie innerhalb von nur 6-7 Wochen nach Ausbruch der Krankheit einen signifikanten Abfall der Antikörperkonzentration zeigten. Long et al. schreiben hierzu, dass der Abfall von IgG und neutralisierenden Antikörpern in der frühen Rekonvaleszenz Einfluss auf die Immunitätsstrategie und serologische Untersuchungen haben wird.

Genau hier sieht AESKU den Ansatzpunkt ihrer quantitativen AEKULISA SARS-CoV-2 Tests und bietet sechs verschiedene Kits zur Detektion und Überwachung des Immunstatus an.

 

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Dem Virus auf der Spur - AESKULISA SARS-CoV-2 Antikörper Tests

Eine sichere Zukunft dank quantitativen SARS-CoV-2 AESKULISA Tests. 

Corona VirusIn der momentanen Situation ist es kaum nötig, über die dringende Notwendigkeit eines wirksamen und robusten Impfstoffs zur Behandlung von COVID-19 zu diskutieren, denn unsere Gesellschaft und die Menschheit selbst befinden sich im Ausnahmezustand. Aber nicht nur ein Impfstoff ist dringend notwendig, auch muss der Erfolg einer Impfung mittels quantitativer Tests überprüft werden. Quantitative Tests die auf neutralisierende Antikörper, also Antikörper die auf ein Pathogen antworten und es abbauen, erlauben es im Praxisalltag den Erfolg einer Immunantwort und einer Impfung zu bestimmen.

Zur Bestimmung einer Immunreaktion hat sich, schon seit Jahren, die Untersuchung der Immunglobuline (Ig) sogenannte Antikörper etabliert. Da Proteinstrukturen auf der Oberfläche eines Pathogenes (Bakterium, Virus) spezifisch, also für spezielle Organismen einmalig, sind und das Immunsystem den passenden Antikörper bildet, ist es möglich zur Bestätigung einer Infektion verschiedene Antikörper zu Untersuchen. Im Fall der SARS-CoV-2 Viren, bieten sich das Nukleocapsid Protein (N) und das Spike-Protein (S1) an.

 

AESKU bietet hierfür sechs verschiedene Immunassays an:

AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgM/ IgA / IgG*

AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgA*, IgG* und IgM* sind qualitative und quantitative Immunassays für den Nachweis von humanen IgM, IgA und IgG Antikörpern des hochkonservierten Nukleocapsidproteins (NP) in Serum oder Plasma gegen SARS-CoV-2. Das Nukleocapsid Protein ist ein sehr reaktives Protein, und regt eine sehr starke Antwort des Immunsystems an. Aufgrund dieser starken Immunreaktion stellen sie einen sehr sensitiven Nachweis von Antikörper dar, die eine klare Unterscheidung von positiven und negativen Proben ermöglichen.

Sie sind daher Ideal für den IgM, IgG und IgA Nachweis für Screening und Diagnose. Aufgrund der hohen Sensitivität und der starken Konservierung des Nukleocapsid Proteins in der Familie der Coronaviren ist das Risiko einer Kreuzreaktion mit Antikörpern gegen SARS-CoV-1 erhöht. Da Antikörper gegen das Nukleocapsid Protein nicht neutralisierend wirken, eignen sie sich nicht um den Immunstatus eines Patienten, den sogenannten Antikörpertiter, zu bestimmen.

AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgA*  Antikörpertest (Nukleocapsid Protein)
dient zur Erfassung akuter Infektionen.
AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgG* Antikörpertest (Nukleocapsid Protein)
erlaubt die Bestätigung eines Erregerkontakts und die Bestimmung des Immunstatus.
AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgM* Antikörpertest (Nukleocapsid Protein)
erlaubt es die erste spezifische Reaktion des Immunsystems zu bestimmen.

Bei AESKU finden immunogene, in Insektenzellen exprimierten Nukleocapsidproteine von SARS-CoV-2, zum sensitiven Nachweis von IgM, IgA und IgG* Antikörpern, Verwendung.

AESKULISA®
Sensitivität
Spezifität
SARS-CoV-2 NP IgA*
98.3 %
> 99%
SARS-CoV-2 NP IgG*
95.2 %
> 99 %

Tabelle 1: Sensitivität und Spezifität der AESKULISA® SARS-CoV-2 NP IgA- und IgG Immunassays wurden durch die Analyse von 76 Serumproben von gesunden Blutspendern (2018) und 20 Personen mit klinisch bestätigtem COVID19 unter Verwendung der klinischen Befunde als Referenz bewertet.

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgM/ IgA / IgG

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA, IgG und IgM sind qualitative und quantitative Immunassays für den Nachweis von humanen IgM, IgA und IgG Antikörpern gegen das hochspezifischen SARS-CoV-2 Spike-Protein (S1) in Serum oder Plasma. Das Spike-Protein hat gegenüber dem Nukleocapsid Protein den Vorteil, dass es stark spezifisch für das SARS-CoV-2 Virus ist.

Somit ergibt sich ein weitaus geringeres Risiko von Kreuzreaktionen mit Antikörpern gegen andere Vertreter der Corona-Virus Familie. IgG Antikörper reagieren gegen die rezeptorbindende Domäne (RBD) auf den Spike-Proteinen und gelten daher als neutralisierend, und eignen sich somit für die Überwachung des Antikörpertiters von Patienten.

AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgA Antikörpertest (Spike Protein)
dient zur Erfassung akuter Infektionen.
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgG Antikörpertest (Spike Protein)
erlaubt die Bestätigung eines Erregerkontakts und die Bestimmung des Immunstatus. Mit ihnen lässt sich
der Antikörpertiter eines Patienten erfassen und überwachen.
AESKULISA® SARS-CoV-2 S1 IgM Antikörpertest (Spike Protein)
erlaubt es die erste spezifische Reaktion des Immunsystems zu bestimmen.

* submitted for Emergency Use Authorization (EUA) in USA

 

Asset 1 2Komponenten der Testkits

  • Beschichtete Mikrotiterplatte mit brechbaren Kavitäten
  • 4 Kalibratoren (A – D), Kalibrator B = cut off Kalibrator
  • Positiv- und Negativkontrolle
  • Verdünnungspuffer (5x konz.; für IgM Nachweise inkl. Rf Absorbent)
  • Waschpuffer (50x konz.)
  • Konjugat (Anti-human IgG / IgA / IgM POD Konjugat)
  • Substrat- (TMB) und Stopplösung
  • Qualitätskontrollzertifikat und Gebrauchsanweisung

 

 

Die AESKULISA SARS-CoV-2 Immunassays bieten dem Endanwender viele einmalige Vorteile, die sie von den Test-Kits der Mitbewerber abheben:

 

  • Verwendung des immunogenen Nukleocapsidproteins zum Nachweis von IgA und IgG Antikörpern gegen SARS-CoV-2
  • Standardisierte Prozessierung von AESKULISA® IgA, IgG und IgM Immunoassays mit kurzen Inkubationszeiten (30 min, 30 min, 30 min) und einheitlichen Inkubationstemperaturen
  • Optimiert für die Inkubation bei Raumtemperatur
  • Kombination verschiedener AESKULISA® in einem Testlauf
  • Gebrauchsfertige, gefärbte, barcodierte Reagenzien und austauschbare Reagenzien zur qualitätssicheren Anwendung im Routinelabor
  • Kosteneffizienz durch Verwendung brechbarer Kavitäten und einer minimalen Anzahl an Kalibratoren und Kontrollen
  • Positiv- und Negativ-Kontrollen gemäß den Anforderungen moderner Richtlinien zum Qualitätsmanagement (z. B. RiLiBÄK)
  • Exakte Quantifizierung der erregerspezifischen IgA, IgG und IgM Antikörperaktivität durch Verwendung der präzisen 4 Parameter Logistik (4 PL) Funktion und 4-Punkt Kalibrierung
  • Verwendung des Kalibrator B als cut off Kalibrator zur qualitativen Bewertung von Patientenproben
  • Schnelle Bewertung optischer Messsignale mit Standardsoftware
  • Exzellente diagnostische Effizienz mit hoher Sensitivität und Spezifität durch sorgfältig ausgewählte Antigene
  • Hohe Präzision und Linearität in weiten Messbereichen durch überlegenes Prinzip zur Antikörperquantifizierung
  • CE-zertifiziert
  • Kompatibilität mit handelsüblichen ELISA Washer- und Reader-Systemen
  • Vollautomatisierte Anwendung mit Triturus®, SQII, DSX und vergleichbaren Automaten
  • Triturus®, SQII, DSX und vergleichbare Instrumente können mit HERA- dem AESKU-Laborautomationsmanager - optimal vernetzt werden

COVID 19
Das schwere akute respiratorische Syndrom (SARS)-CoV, sowie das respiratorische Syndrom des Nahen Ostens (MERS) und SARS CoV 2 (SARS-CoV-2) gehören zur Familie der Coronaviridae. Alle diese drei Viren sind pathogen und verursachen beim Menschen Atemwegsprobleme. Im Dezember 2019 wurde in China eine Reihe unerwarteter Fälle von Lungenentzündung beobachtet.

Die Regierung und die Gesundheitsforscher in diesem Land verfolgten Strategien zur Kontrolle des Ausbruchs des Virus und programmierten eine ätiologische Studie. Letztendlich gab die Weltgesundheitsorganisation (WHO) bekannt, dass das SARS-CoV-2 die Coronavirus-Krankheit 2019 (COVID-19) verursacht.

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Die Inkubationszeit von COVID-19 wird auf 1 bis 14 Tage geschätzt. Die Lunge ist das Hauptorgan, das von COVID-19 betroffen ist, aber in schweren Fällen können auch andere Körperteile wie das zentrale Nervensystem (ZNS), Niere, Leber, Herz, Magen und Darm betroffen sein. Wie bei vielen anderen Atemwegserkrankungen kann der Schweregrad der durch SARS-CoV-2 verursachten Infektion von Patient zu Patient stark variieren.

Nach den neuesten Erkenntnissen waren einige Fälle von SARS-CoV-2-Infektionen mit Lungenentzündung und Atemnot verbunden, während bei einigen Patienten, bei denen SARS-CoV-2 diagnostiziert wurde, ein Atemversagen, ein septischer Schock oder ein Multiorganversagen auftrat. Die Sterblichkeitsrate der Infektion wird mit etwa 2% angegeben. Eine Ansteckung anderer Menschen während der Inkubationszeit und während einer akuten symptomfreien Krankheitsphase ist möglich.

Entdeckung

Entdeckung
Epidemiologische Studien über die frühen Fälle von SARS-CoV-2-Pneumonie haben gezeigt, dass viele Fälle auf dem Fischmarkt in Wuhan, China Kontakt hatten. Die WHO berichtete auch, dass Proben, die auf dem Fischmarkt gesammelt wurden mit SARS-CoV-2 kontaminiert waren. Es war aber noch nicht vollständig geklärt, welche spezifischen Tierarten SARS-CoV-2 in sich tragen. Es ist bekannt, dass SARS-CoV und MERS-CoV von Fledermäusen als Haupt- und Naturreservoir stammen und von Zibet und Kamelen auf den Menschen übertragen werden können.

Taxonomie und Struktur

Taxonomie und Struktur
CoVs sind 120-160nm große, umhüllte einzelsträngige RNA-Viren, sense-positiv, mit tierischem Ursprung und gehören zur Familie der Coronaviridae und zur Kategorie der Nidovirales. Die CoVs werden genotypisch und serologisch in vier Gruppen unterteilt: α, β, γ und δ. Ungefähr 30 CoV-Arten wurden bei Wirbeltieren identifiziert, während beim Menschen CoVs aus den Gruppen α und β dominieren. CoVs gehören zur Gruppe der β-CoVs und SARS-CoV-2 ist nach SARS- und MERS-Viren, die beide ebenfalls zur Gruppe der β-CoVs gehören, das dritte bekannte zoonotische Tier-CoV.

Beim Menschen gibt es mindestens sieben CoVs (hCoVs): SARS-CoV-1 (SARS), MERS-CoV (MERS), SARS-CoV-2 (COVID-19, oder einfach COVID), und die endemischen hCoV-Krankheiten NL63, HKU1, OC43 und 229E, deren entsprechende Viren wie bei MERS mit dem Suffix -CoV bezeichnet werden. Für jedes dieser hCoVs und für CoVs im Allgemeinen werden Adsorption und Fusion durch Spike-Glykoproteine beeinflusst.

Übertragung

Übertragung
Die Übertragung von Mensch zu Mensch erfolgt hauptsächlich aerogen durch feinste Aerosole die beim Ausatmen und Sprechen entstehen (Tröpfcheninfektion). Auch der direkte Kontakt mit Speichel, Sputum oder Nasopharyngealsekreten gilt als hochinfektiös. Da das Virus eine nachgewiesene Überlebendsdauer auf Oberflächen von ungefähr 16 Stunden hat, ist eine Infektion über kontaminierte Oberflächen ebenfalls möglich (Schmierinfektion).

Pathogenese und Replikation

Pathogenese und Replikation
Die Spikes für SARS-CoV-1, SARS-CoV-2 und NL63-CoV binden alle an das Angiotensin-konvertierende Enzym 2 (ACE2), MERS-CoV an Dipeptidylpeptidase 4 (DPP4), HKU1-CoV und OC43-CoV an 9-O-acetylierte Sialinsäuren und 229E-CoV an Aminopeptidase N (APN). Wie von Clustal Omega bestimmt, weisen die Spikes für SARS-CoV-1 und SARS-CoV-2 eine hohe Homologieidentität (76%), aber eine relativ schwache Homologie mit NL63-CoV (30% bzw. 31%) auf. Die Spitzen für NL63-CoV und 229E-CoV haben eine überraschend hohe Homologieidentität (63%), wobei alle anderen paarweisen Identitäten dieser sieben im Bereich von 30%-40% liegen. MERS, SARS und mehrere endemische hCoV-Erkrankungen scheinen eine kurz- bis mittelfristige Immunität gegen Reinfektionen zu verleihen. Die endemischen hCoV-Erkrankungen sind saisonal bedingt und begünstigen die Monate Dezember und Januar, während sich MERS vor allem im Juni ausbreitet. Die Saisonalität von COVID und die Reinfektionsimmunität bleiben drängende offene Fragen.

Die CoV-Virushülle hat einen Durchmesser in der Größenordnung von 80-100 nm, wobei jedes Spike-Glykoprotein in einer Höhe von ∼15-20 nm darüber steht. Am distalen Ende der Virushülle des Trimer-Spike liegen drei Köpfe mit jeweils einer eigenen Rezeptorbindungsdomäne, die vermutlich unabhängig voneinander zwischen einer Aufwärts- (oder stehenden/offenen) und einer Abwärts- (oder liegenden/geschlossenen) Konformation oszillieren können. Aufgrund sterischer Beschränkungen kann es nur in der Aufwärtskonfiguration zu einer ACE2-Bindung kommen. Bei hCoVs im Allgemeinen gibt es drei weitere Domänen des Spike, die als Lappen bezeichnet werden, die sich in der Nähe der Köpfe befinden, wenn sie nach oben zeigen, und die aneinander angrenzen, wenn sie nach unten zeigen. Diese Domänen treten nach folgendem Muster auf: Der Kopf in Kette A (B bzw. C, in dieser Reihenfolge entgegen dem Uhrzeigersinn, wenn man von jenseits des distalen Endes der Virushülle betrachtet) befindet sich proximal zum Lappen in Kette B (C und A). In den Beispielen für MERS-CoV und SARS-CoV-1, die wie beschrieben an die Virushülle gebunden sind, liegen die Epitope ebenfalls auf den Köpfen.

Das mutmaßliche Fusionspeptid aus SARS-CoV-1 liegt zentral zwischen den drei Köpfen und ist bei heruntergeklappten Köpfen vollständig blockiert. Nach der Bindung erfährt der Spike eine dramatische Rekonformation, deren Einzelheiten nicht bekannt sind, obwohl sie schließlich das für ein Klasse-I-Fusionsprotein charakteristische 6-Helix-Bündel liefert. Viele der hCoVs, darunter SARS-CoV-2, gelangen bekanntlich durch Endocytose in die Zelle. In mehreren untersuchten Beispielen ist der Spike mit einem aufwendigen Glykanschild überzogen. Sowohl MERS-CoV als auch SARS-CoV-2, jedoch nicht SARS-CoV-1, unterstützen eine Furinspaltungsstelle, die die Fusion fördern könnte.

Symptomatik

Symptomatik
Neben klinisch völlig unauffälligen Infektionen wurden bisher überwiegend milde Krankheitsverläufe mit grippe-ähnlichen Symptomen und trockenem Husten dokumentiert. In einigen Fällen wurden auch schwere Verläufe mit schweren Lungenentzündungen und kardiovaskulären Symptomen beobachtet. Komplikationen können insbesondere bei Risikopatienten mit Vorerkrankungen wie Hypertonie, Diabetes mellitus und Adipositas oder bei Personen über 60 Jahren auftreten. Hier können lebensbedrohliche Zustände mitunter tödlichem Verlauf eintreten. Neben schweren Schädigungen der Lunge bis hin zum Lungenversagen wurden auch schwerwiegende Spätfolgen in weiteren Organen wie Leber, Nieren, Blutgefäßen und dem Herzen, sowie eine bleibende Schädigung des zentralen Nervensystems beschrieben.

Klinisches Symptom
Häufigkeit
Fieber
87,9 %
Trockener Husten
67,7 %
Unwohlsein und Ermüdung
38,1 %
Erhöhte Speichelproduktion
33,4 %
Riechverlust
30 - 71 %
Kurzatmigkeit
18,6 %
Muskel- oder Gelenkschmerz
14,8 %
Halsschmerzen
13,9 %
Kopfschmerz
13,6 %
Schüttelfrost
11,4 %
Übelkeit / Erbrechen
5,0 %
Schnupfen
4,8 %
Durchfall
3,7 %
Bluthusten
0,9 %
Schwellung der Bindehaut
0,8 %

Therapie und Prophylaxe

Therapie und Prophylaxe
Eine spezifische Therapie existiert bisher nicht, befindet sich aber in der Entwicklung (Stand 20.05.2020). Alternativ werden daher Virostatika wie Proteasehemmer der RNA verwendet. Jegliche derzeit angewandten Therapien zielen darauf ab, die Symptome zu lindern.

Immunantwort und Antikörperprofile

Immunantwort und Antikörperprofile
IgM, IgG und IgA Antikörper werden bei Primärinfektionen mit Pathogenen, in diesem Fall SARS-CoV-2 gebildet. Der Organismus ist in der Lage pathologische Strukturen eines Eindringlings (Viren, Bakterien) zu identifizieren (Antigene) und darauf eine maßgeschneiderte Immunantwort (Antikörper, Ig) zu bilden, das sogenannte „Schlüssel-Schloß-Prinzip“. Diese Antikörper werden nach dem Ort und der Zeit des Auftretens im Rahmen einer Immunantwort unterschieden. IgM und IgA sind die Klassen der Antikörper welche der Körper als erstes bildet, also Antikörper der Akuten-Phase. IgM und IgA sind innerhalb einiger Wochen bis Monate nach einer Infektion nicht mehr nachweisbar.

Antikörper der G-Klasse, also IgG, bilden das „Gedächtnis“ des Immunsystems und sind in der Regel das ganze Leben des Patienten nachweisbar. Sie werden erst mit Abklingen der akuten Infektionsphase gebildet und persistieren länger im Blut. Im Falle einer Reinfektion bilden sich die IgA und IgG-Antikörper sehr schnell, während IgM Antikörper oft nicht nachweisbar sind.

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